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公司產品
RNAi項目服務
吉瑪目前的細胞生物學檢測項目主要有：細胞增殖(CCK-8 )、細胞周期& 凋亡(FACS),侵襲遷移、劃痕、粘附、克隆形成等項目。
RNAi技術不僅可作為研究功能基因的強大武器，并且可以抑制致病基因的表達并作為一種潛在的治療方式用于疾病的治療。RNAi實驗的成功關鍵在于以下幾點：
1、靶序列的選擇和siRNA的設計
2、細胞系和細胞培養體系
3、轉染條件
4、靶基因的mRNA的積累和替代比率
5、目的蛋白的半衰期
6、mRNA、蛋白質和表型水平上的精確分析
GenePharma公司RNAi服務團隊的專業的技術服務能夠幫助客戶最大化實現RNAi技術應有的價值和避免一些實驗錯誤。我們的研究隊伍將和您一起開發更加廣泛有效的的解決方案。
RNAi服務包括兩個方面：
1、化學合成RNAi服務
2、載體介導的RNAi服務
3、慢病毒介導的RNAi服務
GenePharma RNAi 服務應用領域：
功能基因組學、基因治療、藥物靶篩選、細胞信號傳導通路分析、蛋白質相互作用等。
1.化學合成siRNA項目服務
1、RNAi 雙鏈設計：客戶需要與我們共同討論實驗方案，并提供靶基因名稱、序列或GeneBank ID等。
2、siRNA合成
3、根據客戶要求可進一步轉染哺乳動物細胞；
4、檢測抑制效果：熒光定量PCR檢測mRNA表達情況、Western Blot檢測蛋白表達情況。
5、提供實驗報告：siRNA序列；熒光定量PCR檢測報告、Western Blot圖片等。
2.載體介導的RNAi項目服務
1、shRNA設計：客戶需要與我們共同討論實驗方案，并提供靶基因名稱、序列或GeneBank ID ID等。
2、 shRNA合成
3、 shRNA載體的選擇，GenePharma公司提供pGPU6/GFP/Neo、pGPH1/GFP/Neo等多種載體
4、根據客戶要求可進一步轉染哺乳動物細胞；
5、檢測抑制效果：熒光定量PCR檢測mRNA表達情況、Western Blot檢測蛋白表達情況。
6、提供實驗報告：shRNA序列、構建載體的測序報告；熒光定量PCR檢測報告、Western Blot圖片等。
服務費用：
根據具體實驗要求而定
參考價格如下：
| 目錄號 | 服務項 | 價格 | 交貨期 |
| K-01 | siRNA/shRNA轉染、定量PCR檢測和Western Blot | ￥11980 | 25-30個工作日 |
| K-02 | siRNA/shRNA轉染、定量PCR檢測 | ￥9800 | 25-30工作日 |
| K-03 | SiRNA/shRNA轉染、Western Blot | ￥9800 | 25-30工作日 |
3.慢病毒介導的RNAi項目服務
1、 根據客戶需要進行慢病毒構建
2、根據客戶需要進行病毒顆粒的包裝
3、 根據客戶需要進行RNAi效果的檢測
服務費用具體價格和實驗相關事宜請聯系：
服務項目聯系郵箱：service@genepharma.com; szservice@genepharma.com;
產品項目聯系郵箱：support@genepharma.com；szsupport@genepharma.com；
產品訂購聯系郵箱：order@genepharma.com; szorder@genepharma.com
3.RNAi單項服務
1.RNAi 設計服務
成功的RNAi試驗設計是您試驗成功的前提。吉瑪公司專業的設計人員為您提供完整的RNAi試驗設計服務。吉瑪公司為您提供優化的siRNA,shRNA以及RNAi檢測的探針和引物的設計服務。完善的試驗設計，精準的靶標以及引物設計讓您的試驗節省人力和物力。
2.RNAi相關試劑的合成服務
高質量的siRNA,shRNA載體，RNAi檢測的探針和引物是保證您試驗準確性和可靠性的關鍵因素，吉瑪公司為您提供全套的產品解決方案。
3.RNAi轉染優化服務
為了使得您的試驗獲得最大化的干擾效果，siRNA或者shRNA的轉染條件需要優化。RNAi合成試劑的高效的傳遞條件需要針對具體的細胞進行轉染參數的優化。吉瑪公司的RNAi 熒光標記的陰性對照可以幫助您進行轉染效率的優化。同時吉瑪公司陽性對照以及實時定量PCR試劑合可以幫您將轉染程序得到最好的優化結果
4.RNAi干擾效果檢測服務
我們用實時定量PCR方法檢測mRNA水平的基因敲除效果
我們通過Wester blot方法檢測蛋白水平的基因敲減效果
| 目錄號 | 服務項目 | 價格 | 交貨期 |
| S-01 | RNAi 設計服務 | 詢價 | 2個工作日 |
| S-02 | RNAi相關試劑的合成服務 | 詢價 | 1周 |
| S-03 | RNAi轉染優化服務 | 詢價 | 3周 |
| S-04 | RNAi干擾效果檢測服務 | 詢價 | 3周 |
目的基因shRNA片段篩選
一、細胞培養
人乳腺癌細胞購自中科院上海細胞庫，常規培養使用含10% FBS (Gibco)的Leibovitz’s L-15培養基(Gibco)(含1.5 mM L-Glutamine, 100 U/ml penicillin, 100 μg/ml Streptomycin)中，37oC 100% 空氣培養箱中培養。
二、目的基因siRNA片段的設計與合成
根據目的基因的序列，共選擇了5個位點設計shRNA, 。實驗所用shRNA的設計由吉瑪公司（GenePharma, Shanghai）提供。
寡核苷酸的設計
shRNA模板中的loop結構選用了TTCAAGAGA以避免形成終止信號，shRNA的轉錄終止序列采用T6結構。正義鏈模板的5’端添加了CACC，與BbsI酶切后形成的粘端互補；反義鏈模板的5’端添加了GATC，與BamHI酶切后形成的粘端互補；如果siRNA的第一個堿基不是G，則在CACC后補加一個G。
shRNA模板中的loop結構選用了TTCAAGAGA以避免形成終止信號，shRNA的轉錄終止序列采用T6結構。正義鏈模板的5’端添加了CACC，與BbsI酶切后形成的粘端互補；反義鏈模板的5’端添加了GATC，與BamHI酶切后形成的粘端互補；如果siRNA的第一個堿基不是G，則在CACC后補加一個G。
1248 target
CTGTCAGCCCGAATGGGAA
1248S:
5-CACCGCTGTCAGCCCGAATGGGAATTCAAGAGATTCCCATTCGGGCTGACAGTTTTTTG-3
1248A:
5-GATCCAAAAAACTGTCAGCCCGAATGGGAATCTCTTGAATTCCCATTCGGGCTGACAGC-3
一、細胞培養
人乳腺癌細胞購自中科院上海細胞庫，常規培養使用含10% FBS (Gibco)的Leibovitz’s L-15培養基(Gibco)(含1.5 mM L-Glutamine, 100 U/ml penicillin, 100 μg/ml Streptomycin)中，37oC 100% 空氣培養箱中培養。
二、目的基因siRNA片段的設計與合成
根據目的基因的序列，共選擇了5個位點設計shRNA, 。實驗所用shRNA的設計由吉瑪公司（GenePharma, Shanghai）提供。
寡核苷酸的設計
shRNA模板中的loop結構選用了TTCAAGAGA以避免形成終止信號，shRNA的轉錄終止序列采用T6結構。正義鏈模板的5’端添加了CACC，與BbsI酶切后形成的粘端互補；反義鏈模板的5’端添加了GATC，與BamHI酶切后形成的粘端互補；如果siRNA的第一個堿基不是G，則在CACC后補加一個G。
shRNA模板中的loop結構選用了TTCAAGAGA以避免形成終止信號，shRNA的轉錄終止序列采用T6結構。正義鏈模板的5’端添加了CACC，與BbsI酶切后形成的粘端互補；反義鏈模板的5’端添加了GATC，與BamHI酶切后形成的粘端互補；如果siRNA的第一個堿基不是G，則在CACC后補加一個G。
1248 target
CTGTCAGCCCGAATGGGAA
1248S:
5-CACCGCTGTCAGCCCGAATGGGAATTCAAGAGATTCCCATTCGGGCTGACAGTTTTTTG-3
1248A:
5-GATCCAAAAAACTGTCAGCCCGAATGGGAATCTCTTGAATTCCCATTCGGGCTGACAGC-3
結果分析
各組細胞轉染的圖片如下，每一組都是在同一視野下拍攝的，mock表示轉染試劑對照，NC表示陰性對照，每一組有兩張圖，分別為同一個視野下的轉染了綠色熒光蛋白的照片和明視野下細胞照片。
24小時后
1， 805干擾組；2, 1222干擾組；3， 1248干擾組；4， 1658干擾組；B，Blank組；M，mock組；N，陰性對照組；K，空載體對照
從real-time PCR的分析結果可以看到，Mock與空白對照Blank及空載體對照樣品基因表達水平接近，實驗結果真實可靠。805和1222有較好的干擾效果。
一、Western blot法檢測RNA干擾效果
本實驗采用目的基因的單克隆抗體來檢測轉染48小時后樣本的蛋白表達狀況。
由于該抗體以重組肽段為抗原，在體內，肝素酶是由兩個亞基組成的異源二聚體，兩個亞基分子量分別約為50kDa和8kDa，組成的肝素酶前體分子量約為65kDa，如圖
圖8 不同時期的樣本蛋白的表達(β-actin作為內參照)
注：條帶從左至右共8個條帶，依次為1. 805干擾組2. 1222干擾組 3. 1248干擾組4 1658干擾組 5. NC 6.Mock 7.Blank 8.空載體
使用方法
應用實例
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服務收費標準 |
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目錄號 |
產品名稱 |
價格 |
交貨期限 |
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H02001 |
RNAi設計服務 |
詢價 |
2個工作日 |
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H02002 |
RNAi相關試劑的合成服務 |
詢價 |
1周 |
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H02003 |
RNAi轉染優化服務 |
詢價 |
1周 |
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H02004 |
RNAi干擾效果檢測服務 |
詢價 |
2周 |
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H02005 |
RNAi穩定細胞株的篩選 |
詢價 |
2個月 |
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H03001 |
流式細胞技術檢測服務 |
詢價 |
1周 |
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H04001 |
細胞周期檢測服務 |
詢價 |
1周 |
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H04002 |
細胞凋亡檢測服務 |
詢價 |
1周 |
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H04003 |
細胞活性測定服務 |
詢價 |
2周 |
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H04004 |
細胞基質黏附實驗服務 |
詢價 |
1-2周 |
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H04005 |
細胞侵襲實驗服務 |
詢價 |
1-2周 |
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H04006 |
細胞免疫熒光實驗 |
詢價 |
1-2周 |
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H04007 |
細胞免疫吸附實驗 |
詢價 |
1-2周 |
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細胞基質黏附實驗服務：CKK-8法進行檢測。客戶需提供：檢測細胞及其培養條件和處理方法。選擇觀察時間點。檢測包括3-5組細胞，每組3個重復。我們提供的結果包括：1細胞黏附情況照片。2（可選）酶標儀檢測的原始數據與統計分析結果。具體價格敬請來電咨詢。
細胞免疫熒光實驗：利用抗原－抗體特異性結合的原理，用經熒光染料標記的抗體對細胞內的蛋白質進行定性或定量研究的方法。流程：細胞爬片 轉染或藥物處理 固定透化 封閉 一抗孵育 熒光二抗孵育 熒光顯微鏡觀察拍照。客戶需要提供熒光一抗及二抗，具體價格敬請來電咨詢。
酶聯吸附實驗（ELISA)：4步驟幫您輕松檢驗各種蛋白大分子抗原：（1）將特異性抗體與固相載體聯結，形成固相抗體。（2）加受檢標本，保溫反應，去除未結合物質。（3）加酶標抗體，保溫反應。固相免疫標抗體結合。（4）加底物顯色。服務價格：檢測3-5組樣品，每組樣品3個復孔，具體價格敬請來電咨詢。
細胞遷移、侵染實驗服務項目：鋪有Matrigel的特殊濾膜，正常細胞不能自由穿過。在下室中加入趨化劑，上室加有經過處理的重懸腫瘤細胞，具有侵襲能力的腫瘤細胞在趨化劑誘導下開始穿膜運動，并粘附在濾膜下表面。具體價格敬請來電咨詢。
細胞增殖實驗使用CCK-8方法： 據活細胞線粒體內的脫氫酶可將試劑中的有效成分轉變為有顏色的Formazan，并可被酶標儀檢測，間接反應活細胞數量。具體價格敬請來電咨詢。（包括4組細胞，每個樣品3-5個復孔，客戶可以選擇檢測時間點。）
穩定細胞株篩選服務： 1.抗生素篩選濃度確定（致死曲線）：2. 細胞接種：轉染實驗前天接種細胞。轉染時細胞密度達到60%~80%；3. 細胞轉染（脂質體）或侵染（慢病毒）4. 利用質粒抗性篩選穩定干擾細胞株；5. 目的基因干擾效果驗證。 周期2-3個月，提供T25穩篩細胞株一瓶，具體價格敬請來電咨詢。
miRNA靶基因預測雙熒光素酶報告系統：吉瑪采用promega的psicheck2.0載體系統構建靶基因3‘UTR系統。該系統可檢測siRNA/miRNA與靶基因的調控關系，報告熒光（hRluc)驗證si/miRNA調控作用，校正熒光（hluc)檢測質粒表達效率。另外客戶還可選擇構建突變UTR系統。具體價格敬請來電咨詢。
項目具體價各和實驗相關事宜請聯系吉瑪公司：rnaisupport@genepharma.com，電話：021-51320195-8009。雙方協商一致后簽訂技術服務合同，我們嚴格按照服務合同開展技術服務。
下單前請務必核對訂購表客戶信息和訂購內容無誤，訂單一經確認，當天即啟動生產。 超過當日17：00后不能修改或者取消，如果需要取消訂單，由此產生的費用，將由客戶承擔。
【取消訂單費用規則】
（1）當日17：00前，免費修改或取消。
（2）當日17：00到次日17：00前，按該項產品金額的50%收取。
（3）次日17：00后，按該項產品金額的100%收取。